新品种选育方法--杂交的实施方法
1．杂交方式的确定
进行牡丹有性杂交一般有3种方式可供选择。
(1)成对杂交：又称简单杂交，即两个亲本甲和乙的配对杂交。成对杂交又分正交和反交。如果以甲为母本的称为正交，则以乙为母本的称为反交。正交和反交是相对而言，它们所产生的杂种后代在性状遗传表现上，有时是相似的，有时则有较大差别。这是因为，杂种的个体发育最早是在母本上进行的，受母本的影响较大，因此，杂种后代在某些特征和性状上可能较多倾向于母本。成对杂交是目前花卉育种工作中一种重要杂交方式，取得成果较多。
(2)回交：两个亲本杂交后产生的第一代杂种(F1)再和父母本中某一个亲本进行杂交就叫做回交。回交的目的是让父本或母本的性状在杂种后代中得到加强。
(3)复合杂交：即采用两个以上亲本进行多次杂交。如用甲和乙进行杂交后产生的第一代杂种(F1)再和丙进行杂交；其杂交的后代再和丁进行杂交等。复合杂交有可能把多个亲本的优良性状结合在一起。
2．杂交工作的准备
(1)杂交工作所需工具、器皿与材料列如表9—1。
表9—1人工杂交所需工具、器皿、材料
(2)调节亲本的开花日期：当进行杂交授粉时，只有在父母本花期相遇的情况下，才有可能使杂交获得成功。但牡丹品种花期有早、中、晚之分。不同品系的牡丹花期相差更大。如原产于江南的‘凤丹’其花期早于中原牡丹3-4天，而西北的紫斑牡丹花期又晚于中原牡丹3-5天。日本、法国、美国的牡丹品种开得也比较晚。因此在杂交之前就要视情况调节杂交组合中父、母本的花期。如将晚开品种作为母本似乎问题还不大，而如果将早开品种作为母本，就要将父本植株挖起进行催花，或就地搭建塑料拱棚增温，以使其早开花早收集花粉。
(3)花粉的采收与贮藏：采收父本花粉要在花朵将开而未开时进行，以免昆虫将其他早开的花粉带入。采收花粉可在露天进行，亦可摘下花朵在室内进行。采粉时可用镊子轻轻将花药取下(尽量不带花丝)，放于预先用70％酒精消过毒的玻璃皿内，需要授粉多个花朵则多收，否则少收，适当多备为好。花粉采收后要薄薄地摊放于白纸上，置于阴凉通风处，并在放花粉的纸上写明品种及采粉日期。约经24小时晾至七、八成干燥后，再将花粉装入小广口瓶内，标明品种及采集日期，放入干燥器内保存。花粉粒很小，放于露天时间过长就会失去生活力，因此花粉的贮藏就显得十分重要。实验表明，牡丹的花粉在温度10-15℃、空气相对湿度50％的条件下，其生活力可保持20-30天。因此把装有花粉的广口瓶放入干燥器后，干燥器内不仅要放干燥剂，还要在干燥器的顶盖与底座之间涂以凡士林，以隔绝空气。然后将干燥器放入有空调房间或窑洞内(温度控制在20℃以下)。使用时尽快将好花粉取出，授过一次粉后(以后还要授第二次、第三次)应立即放回原处。
(4)花粉生活力的测定(花粉发芽试验)：在进行牡丹有性杂交时，有时要从外地采集花粉，需要一些时间；有时因各种原因，已收集、贮藏的花粉不能及时授粉。如果所收藏花粉时间超过7天，就要进行花粉生活力的测定，否则一旦使用了失去生活力的花粉，就不能使母本受精结实，杂交工作将前功尽弃。测定做法为：用纯净蔗糖和重蒸馏水配成10％的蔗糖培养基，再加入0.01％的硼酸和l％的琼脂，充分搅拌后滴在小培养皿或载玻片上。待培养基固化后，将少量花粉撒于其上，在25℃的湿润环境中培养1天后，放在显微镜下测定其花粉萌发率及花粉管长度。上述过程均在无菌条件下操作。如果花粉萌发率在40％以上，花粉管较长，即可作为杂交授粉之用。
